鸡内金
本品为雉科动物家鸡Gallus gallus domesticus Brisson的干燥沙囊内壁。杀鸡后,取出鸡肫,立即剥下内壁,洗净,干燥。
【处方用名】 鸡内金、制内金、炒内金、醋内金。
【规范方法】 鸡内金 取原药材,除去杂质,洗净,干燥,捣碎。
制内金 取砂子置锅内。用中火炒热,加入捣碎分开的鸡内金,拌炒至鼓起,酥脆,取出,筛去砂子.放凉。
炒内金 取净鸡内金,整碎分开,置锅内.用中火加热,炒至表面呈黄色或焦黄色,取出,放凉。
醋内金 取净鸡内金,压碎,置锅内用文上加热,炒至鼓起。喷醋,取出,干燥。
每鸡内金100kg,用米醋15kg。[1]
【药典方法】 鸡内金 洗净,干燥。
炒鸡内金 取净鸡内金,置热锅中,用文火炒至鼓起;或取沙子置锅内,一般用武火炒热后,加入净鸡内金,不断翻动,烫至鼓起,放凉。
醋鸡内金 取净鸡内金置热锅中,用文火炒至鼓起,喷醋,取出,干燥。
每100kg鸡内金,用醋15kg。[2]
【量化方法】1.温度 较适当温度再232-258℃之间,时间再39-49秒钟之内。 [3]
2.砂温判别:当翻动热砂无烟时砂温在230℃以下,当翻动热砂有青烟冒出时,砂温在230-260℃之间,当冒出极浓的青烟时,砂温已超过270℃。 [4]
3.砂烫前处理 在50-60℃的温水中,加入适量的食用碱(100kg水用0.4kg食用碱)溶化,然后投入鸡内金快速洗涤,及时捞出,放入事先准备好的竹篓中,用水冲洗,晒干或烘干,再砂烫。此法药物洁净,发泡卷曲率高,色泽一致。 [5]
4.凝胶电泳法 鸡内金生品有8条谱带,砂炒品未见谱带,说明温度高,时间长的炮制方法对蛋白质影响大,损失多。 [6]
【成品性状】鸡内金 呈不规则皱缩的囊形片状,长约30-40mm,宽约30mm,厚约0.5mm,黄色、黄绿色或黄褐色,半透明状,且明显的纵横的条棱状皱纹,质轻且脆,易脆,臭微腥,味微苦。
制鸡内金 呈不规则鼓起的卷片状,表面颜色加深,多具黄色,条状皱纹鼓起尤为显著,稍具光泽,质松脆,易碎。
【鉴别】
1.红外光谱法
称取鸡内金约1g,分别加入甲醇溶液各loml,振摇均匀,放置,冷浸24小时,滤过,滤液浓缩约为lml,作为供试品制备液。以上三种提取制备液分别采用KBr直接研磨压片、或采用涂膜法后进行检测并绘制红外光谱图。[7]
2.凝胶电泳法
样品的制备 称取鸡内金样品,分别加入稀释4倍的浓缩胶缓冲液和少量石英砂研磨,离心20min,取上清液置冰箱中备用。
电泳操作 样品上清液加入等体积的40%蔗糖液混匀,用微量注射器进样。在电极缓冲液中加入澳酚蓝指示剂示踪。电泳开始时,电流控制在15mA,样品进人分离胶后加大到25mA。整个电泳过程维持电流强度不变,待示踪指示剂距前沿约lcm时,停止电泳,取出胶板,先在水中漂洗,然后放入0.2%的考马斯亮蓝R250染色液中,在37℃染色1h,再用含2O%甲醇和7%醋酸的脱色液脱色,反夏更换脱色液,直至背景无色为止。
电泳图谱测绘 按泳动距离将电泳图谱分为慢速(A)、中速(B)、快速(C)三个区,按公式(泳动率=蛋白质泳动距离/指示剂泳动距离)计算各样品谱带的泳动率。根据样品谱带的泳动率、形态、着色度绘制电泳图谱。[8]
3.高效毛细管电泳法
样品溶液的制备 取生药样品0.5 g,加入蛋白提取液5 ml,在冰浴中研磨成匀浆状,转移至离心管内,以5000r·min-1离心20 min,取上清液备用。Tris-甘氨酸蛋白提取液:Tris0.6g,甘氨酸2.88g,加蒸馏水溶解至1000ml。碱性蛋白提取液:Tris-HCI0.1 mol·L-1,0.1%抗坏血酸,琉基乙醇10 mmol·L-1,pH 8.0。酸性蛋白提取液:柠檬酸80 mmol·L -1,Na2HP0432 mmol·L-1,抗坏血酸5 mmol·L-1,琉基乙醇10 mmol·l-1,pH2.8a。
电泳条件 电解缓冲液为150 mmol·l-1,硼酸盐溶液(pH8.5);电压为20 KV ;温度20℃;紫外检测波长200nm;重力进样,时间5s。开机后先用0.1mol·l-1氢氧化钠冲洗毛细管2 min,再用去离子水冲洗5 min,然后用缓冲液冲洗至基线平稳后开始进样。每两次进样之间设定缓冲液冲洗2 min。[9]
【含量测定】
1.氨基酸的测定 测试条件:缓冲液流量0.225ml/min;茚三酮流量0.3ml/min;柱温53℃;色谱柱4×150mm;分析时间50min;最低检测限30pmol。
测试条件:缓冲液流量0.4ml/min;茚三酮流量0.3ml/min;柱温57℃;色谱柱4.6×60mm;分析时间30min;最低检测限10pmol。[10]
2甲醛法测定氨基酸的含量 [11]
2.1样品炮制:按全国中药炮制规范1988年版所载方法进行炮制。
2.2样品液的制备:取各种炮制后的样品适量,105℃烘1h至干,粉碎.过60目筛,精密称取细粉约5g,加入70%乙醇浸提3次(第1次100m1, 24h;第2次30m1, 4h;第3次20m1, 2h)。时时振摇,合并3次滤液(洗涤残渣至滤液无色后再洗1-2次).水浴蒸至无醇味,加水溶解定容50m1 o精取上述溶液5m1,置阳离子交换柱上端,待缓慢流至树脂面时,用蒸馏水淋洗至无色,改用2%氨水解吸,收集解吸液水浴蒸干,用水溶解,定容25m1,摇匀即得样液。
2.3标准溶液的制备精密称取甘氨酸标准品0.6554g,加蒸馏水溶解,定容10ml,其氨基氮浓度为12.23mg/ml,冷藏备用。
2.4样品液中总氛墓酸的含全测定精取样品液5m1,加蒸馏水75ml,在酸度计上用NaOH溶液调节pH值为7。加l 0ml中性甲醛,搅拌lmin,再用NaOH溶液滴至pH为9。记下加入甲醛后所消耗的NaOH体积数VA。用同法测定空白溶液,所消耗的NaOH体积数为VB,按下列公式计算总氨基酸含量,结果见表下页表1,总氨基酸的含量%=[N(VA-VB)X14.008]/W
3.微量元素的测定 测试条件:温度20℃;湿度40%;工作电压220V;工作功率1.1KW;反射功率<5W;溶液提升量3ml/min;冷却气流量17LPM;等离子气流量1LPM;载气流量0.3LPM。[12]
【性味与归经】 甘,平。归脾、胃、小肠、膀胱经。
【功能与主治】 健胃消食,涩精止遗。用于食积不消,呕吐泻痢,小儿疳积,遗尿,遗精。
【用法与用量】 3~9g。
【贮藏】 置干燥处,防蛀。
表1样品中氨基酸含量测定结果
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药政管理局.全国中药炮制规范[M].北京:人民卫生出版社,1988:337.
[2] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京,化学工业出版社,2005:133.
[3]傅宝华,廖为仁.第二届全国中药饮片炮制工艺改革提高质量学术会议论文集,1990,11:375.
[4]傅宝华,廖为仁.第二届全国中药饮片炮制工艺改革提高质量学术会议论文集,1990,11:375.
[5]孙力霞,中国中药杂志,1993,9:538.
[6]张林碧,宋宝珠,第二届全国中药饮片炮制工艺改革提高质量学术会议论文集,1990,11:166.
[7]钟秀枝,王从义,姜丽莎,等. 红外光谱法鉴别鸡、鸭、鹅内金[J].中药材,1996,19(9):452.
[8]石俊英,彭艳丽,李定格,等.哈蟆油、鸡内金等动物类中药及其混淆品的电泳鉴别研究[J].山东中医杂志,1994,13(2):73.
[9]陈振德,许重远,谢立,等. 蛋白多肤高效毛细管电泳法鉴别鸡内金与鸭内金[J].中药材,2002,25(4):246.
[10]国家标准化管理委员会.食物中氨基酸的测定方法(标准号: GB/T 14965-1994) [S].
[11] 许腊英,毛维伦,唐慧慧,等.21种动物药饮片中总氮基酸的甲醛法侧定[J].湖北中医杂志,1997,19(3);54~55.
[12] 张桂英,凌笑梅,张娅婕,等.中华鳖、鳖甲及鳖甲提取物中微量元素的测定[J].吉林中医药,1995,(5):38.